公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

描述：氣溶膠是懸浮于氣體介質中粒徑一般為 1 nm ~ 1 mm 的固體、液體微小粒子形成的膠溶狀態(tài)散體系，其分 散并懸浮在氣體介質中的核酸聚合物，廣泛存在于實驗室 桌面、儀器、耗材以及空氣中。 DNA 氣溶膠與核酸擴增過程（PCR、LAMP 等）相 伴相生?？諝馀c液體面摩擦、離心機離心、劇烈地搖動反 應管、PCR 開蓋、移液器的反復吸樣、污染物的外泄等 途徑，都會產生 DNA 氣溶膠。分子實驗室作為科研和臨 床檢驗場所，PCR（或 LAMP）的使用頻率較高，且樣本 和擴增目標經常出現(xiàn)多批次相同的情況，DNA 氣溶膠污 染在實驗區(qū)域內不斷累積，污染風險不斷增加，假陽性的 發(fā)生頻率也越來越高。PCR 等技術的高擴增效率，產生 的核酸氣溶膠污染，會導致檢測結果的假陽性。假陽性意 味著實驗不可信，并且直接造成實驗室經濟損失。更嚴重 的是，如果形成氣溶膠污染，則可引起整個 PCR 實驗室 的污染，甚至要關閉實驗室。 由于 DNA 高耐熱性、高吸附能力、對有機溶劑的高 耐受性特點，無論采用高壓滅菌、清水沖洗、酒精擦洗均 不能去除 DNA 污染。 全新開發(fā)的強力核酸 酶（DNA Cleaning 酶），可在室溫 15min 內將 DNA 污染物降解為 2-6 bp 的寡核苷酸，無論是移液器、PCR 儀、耗材、實驗室桌面上的 DNA 吸附污染物均被酶解。 DNA 被酶解后，DNA Cleaning 酶可在 60℃烘干 10min 或者 70%酒精擦拭后不可逆失活，從而避免后續(xù)對實驗 的影響。該制品不含任何有機毒性溶劑，無毒、無腐蝕性， 不對設備造成任何損傷。

 儲存： -20℃可保存 3 年。 

PCR 反應需要使用哪些試劑和設備？

試劑:
模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節(jié)反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產物；
設備：
PCR儀：用于控制反應溫度，保證PCR反應時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制；電泳槽：用于分離PCR擴增產物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是，只有在有序齊全的基礎上，才能進行PCR反應并得出準確結果。

PCR相關基礎實驗：

PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：

一、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。

二、退火或稱接合,復性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

三、延伸：

DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應條件優(yōu)化：

1、變性溫度和時間：

保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復性溫度和時間:

PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高，產物特異性越高。復性溫度越低，產物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設定。

3、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間，可根據(jù)待擴增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴增增加。

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