公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

產(chǎn)品介紹：TRzol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。它在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機(jī)層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA可以通過(guò)異丙醇沉淀來(lái)回收。

無(wú)論是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織，該方法對(duì)少量及大量的組織和細(xì)胞均有較好的分離效果。TRzol試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)的樣品。所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。TRzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠做RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+選擇、體外轉(zhuǎn)錄、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆。

TRzol試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙錠染色，可見(jiàn)許多介于7 kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb (28S)和~2kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA，5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A 260 /A 280 比值≥1.8。

產(chǎn)品儲(chǔ)存：TRzol在室溫下能穩(wěn)定保存12個(gè)月。盡管如此，為達(dá)到最佳效果，我們建議保存在2-8℃的環(huán)境下。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥(niǎo)苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過(guò)程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類(lèi)的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成，每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟：

一、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前，通常加熱長(zhǎng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘，接下來(lái)PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱(chēng)接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三、延伸：

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開(kāi)始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴(lài)于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴(lài)于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr（來(lái)自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1、變性溫度和時(shí)間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再?gòu)?fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過(guò)高或高溫持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過(guò)程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí)，過(guò)高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長(zhǎng)延伸時(shí)間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意，延伸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說(shuō)20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品：

TRzol（總 RNA 提取試劑）( 紅 )	Pandemic2009H1N1 流感病毒 HA 基因核酸檢測(cè)試劑盒	輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒（比色法）
TRzol（總 RNA 提取試劑）( 無(wú)色 )	季節(jié)性流感病毒 H3N2 亞型 HA 基因核酸檢測(cè)試劑盒	NAD激酶（NADK）測(cè)試盒（比色法）
TRzol LS（液體樣本 RNA 提取試劑）	H7N9 亞型病毒 HA 基因核酸檢測(cè)試劑盒	乳酸脫氫酶（LDH）測(cè)試盒（比色法）
RNApure 超純總 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I)	H7N9 亞型病毒 NA 基因核酸檢測(cè)試劑盒	NAD蘋(píng)果酸脫氫酶（NADMDH）測(cè)試盒（比色法）
EASYspin 全血 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I )	乙型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒	NADP蘋(píng)果酸脫氫酶（NADPMDH）測(cè)試盒（比色法）
EASYspin 組織 / 細(xì)胞 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I)	乙型流感病毒 Yamagata 系核酸檢測(cè)試劑盒	線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測(cè)試盒（比色法）
EASYspin 植物 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I)	乙型流感病毒 Victoria 系核酸檢測(cè)試劑盒	NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒（比色法）
PLANTaid 植物 RNA 助提劑	病毒 H7N9 變異株( HPAI-H7)核酸檢測(cè)試劑盒	檸檬酸合酶(CS）測(cè)試盒（比色法）
病毒基因組 DNA/RNA 快速提取試劑盒	季節(jié)性流感病毒 H1N1 亞型 HA 基因核酸檢測(cè)試劑盒	乙醇含量測(cè)試盒（比色法）
RNAclean RNA 清潔純化試劑盒	丙型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒	乙醇脫氫酶（ADH）測(cè)試盒（比色法）
RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲(chǔ)存液	歐亞類(lèi)禽豬流感病毒( EA-H1N1 )核酸檢測(cè)試劑盒	甲醛脫氫酶（FDH）測(cè)試盒（比色法）
RNAsafe 高效 RNase 滅活劑	甲型流感病毒 / 乙型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒	乙醛脫氫酶（ALDH）測(cè)試盒（比色法）
RNAlong RNA 長(zhǎng)期保存液	H7N9 亞型病毒核酸檢測(cè)試劑盒 / 含內(nèi)標(biāo)	輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒（比色法）
RNase Away 即用型強(qiáng)力 RNase 滅活劑	季節(jié)性流感病毒 H3N2 亞型核酸檢測(cè)試劑盒	NADP磷酸酶（NADPase）測(cè)試盒（比色法）